Polymerase-Kettenreaktion: wieso abschließend 72°C über mehrere Minuten?
- Denaturierung (z.B. 95°C, 10min)
- Hybridisierung (z.B. 58°C 30sek), Elongation (z.B. 72°C, 45sek), Denaturierung (z.B. 95°C, 45sek)...
So weit, so gut. Aber wieso wird nach Abschluss der letzten Elongation die Temperatur für mehrere Minuten auf 72°C gehalten? (so wie hier) Was ist der Zweck allgemein und was macht die Taq-Polymerase dabei?
LG
2 Antworten
Dabei geht es drum, alle noch nicht ganz fertigen Produkte zu Ende zu schreiben. Ob das in einer Zeit, in der proof-reading polymerasen wie Phusion in 30s volle 1kb schaffen für 10 Minuten Sinn macht sei mal dahingestellt. Historisch machte es wohl Sinn...
Die Taq-Polymerase wird aus Bakterien gewonnen, die in heißen Quellen leben, deshalb ist ihre optimale Arbeitsgeschwindigkeit 72°C und deshalb wird die Temperatur auf dieser Temperatur gehalten. Sie setzt Nucleotide an die DNA an.
Das ist schon klar. Aber die Frage ist halt, warum nach der letzten "regulären" Elongationsphase über mehrere Minuten dieses Temperaturoptimum der Polymerase gehalten wird.