DNA isolieren für PCR?
Vor der PCR muss ja die DNA erstmal isoliert werden. Wie funktioniert das?
In meinem Beispiel geht es um die Aufklärung einer Straftat und man möchte den Verdächtigen finden. Am Tatort findet man Blut (vermutlich vom Täter). Um die PCR hier anzuwenden muss erst die DNA isoliert werden, also aus dem Organismus raus (oder?).
Wie funktioniert das?
1 Antwort
Das habe ich heute gemacht. Aber ich arbeite mit Tieren, nicht Menschen.
Es gibt Protokolle online, die die Methode beschreiben. Zuerst muss man die Blutzellen lysieren. Das macht man oft mit Proteinase K (ein Enzym) und "Lysis Buffer" (Salz + Tris). Manchmal kann man zirkulierende freie DNA (cfDNA) benutzen, und dann braucht man keine Lyse, aber das ist kompliziert.
Nach die Lyse muss man die DNA von andere Komponenten (z.B. Proteine) separieren. Dafür "wascht" man die Lösung mit Alkohol und zentrifugiert. Die DNA fällt runter. Schließlich löst man die DNA mit Wasser oder "Elution Buffer".
Danach kann man die Konzentration mit Spektrophotometer messen, um zu entscheiden, wie viel Lösung man für PCR braucht.