Gentransfer und Plasmide?
Hallo,
Ich verstehe etwas nicht. Also der Ausgangspunkt ist der Folgende:
Restriktionsenzyme schneiden an bestimmten Stellen eines aus Bakterien isolierten Plasmids, sodass sticky ends wie bei dem zuvor gewonnen Gen vorhanden sind, es werden jene DNA-Abschnitte mit den Plasmiden vermischt und jetzt steht auf meinem Arbeitsblatt, das unser Lehrer uns ausgeteilt hat: „Folge sind zwei Arten von Plasmidringen: Eine Art enthält nur Bakterien-DNA, die andere Bakterien-DNA und zusätzlich ein fremdes DNA-Stück."
Ich verstehe nicht, von was für einer Bakterien-DNA die Rede ist. Die Plasmide wurden zuvor aus Bakterien isoliert, sind also die Plasmide gemeint? Wenn ja, wieso wird dann bei ersterem von „enthalten" gesprochen? Es müsste sich doch dann einfach um ein „wieder geschlossenes" Plasmid handeln. Und bei Punkt zwei müsste es sich dann um einen Plasmidring handeln, der an einer Stelle ein fremdes DNA-Stück aufgenommen hat.
Vielen Dank und schönen Sonntag
1 Antwort
Du hast es schon richtig verstanden ^^
Bei dem Plasmid-Ring der nur Bakterien-DNA enthält, handelt es sich einfach um ein Pasmid dass sich wieder geschlossen hat, ohne dass die Fremd-DNA eingefügt wurde.
Das zweite ist, wie du richtig sagst, ein Ring, welcher das Fremdgen aufgenommen hat.
Der komplexe Teil ist nun zwischen den beiden zu differenzieren, also jene Plasmide bei denen der Transfer nicht funktioniert hat, auszusortieren. Da gibt es ein paar Methoden, müsst ihr auch darüber Bescheid wissen?
Also, der Sinn des ganzen ist es ja, ein Gen, beispielsweise das menschliche Insulin-Gen, in einem Bakterium zu exprimieren.
Bakterien machen es uns hier sehr leicht, da sie eben über Plasmide verfügen, kleine runde DNA-Stücke welche natürlich vorkommen und auch natürlich zwischen Bakterien getauscht werden können, so verbreiten sich zum Beispiel Antibiotikaresitenzen. Wir Menschen "kapern" diesen natürlichen Mechanismus in dem wir den Bakterien die von uns manipulierten Plasmide mit dem zusätzlichen Gen unterjubeln. Die Bakterien nehmen die Plasmide auf, ein Prozess den man auch künstlich (z.B. mittels Elektroporation) nachhelfen kann. Sobald sich unser manipuliertes Plasmid in der Bakterienzelle befindet, wird die darauf enthaltene DNA exprimiert, sofern man keinen Fehler gemacht und Beispielsweise die Promotersequenz beim Restriktionsenzymverdau zerstört hat.
Um beim Beispiel von Insulin zu bleiben: Das künstlich eingefügte Insulin-Gen wird im Bakterium exprimiert.
Jetzt gibt es das Problem, dass dieser Prozess nicht zu 100% effektiv ist. Manchmal wird das Gen nicht, oder falsch in das Plasmid eingefügt, manchmal nimmt das Bakterium das Plasmid gar nicht auf. Um jetzt die Bakterien zu ermitteln welche das manipulierte Plasmid aufgenommen haben, werden Selektionmarker eingesetzt. Man sorgt dafür dass sich auf dem Plasmid auch andere Gene, wie zum Beispiel das LacZ-Gen und Antibiotikaresistenz-Gene enthalten sind.
Vielen Dank für diese sehr gute Erklärung! Das ist sehr hilfreich!
Danke für die Antwort :) ja müssen wir auch. Der nächste Schritt ist aber auch relativ unverständlich da heißt es, dass das Gemisch, das man irgendwie differenzieren muss, mit Zitat: „Bakterien, die kein Plasmid enthalten" gemischt wird. Warum wird das denn gemacht?