HPLC: Woher weiß man bei einem Misch-Standard die Elutionsreihenfolge?
Angenommen, ich habe bei einer HPLC-Analyse einen Mischstandard mit Citronensäure, Glucose und Fructose. Woher weiß ich, in welcher Reihenfolge die Analyten auftreten werden?
2 Antworten
Indem Du beispielsweise mittels einer TLC vorher schaust was am schnellsten laufen wird und was nicht. Die Alternative ist, dass Du Dir die Polaritäten betrachtest und Dir klar wirst, dass bei einer C18-Säule beispielsweise unpolares Material relativ schnell eluiert (ist natürlich auch vom Laufmittel abhängig).
Ergänzung: Auch über den Refraktiven Index am Ende kann man ein Ergebnis erhalten
Das wird bei denen schwer, bei diesen Zuckern würde ich über den Refraktiven Index gehen. Denk mal nach, dass die Zucker eine gewisse optische Aktivität haben ;)
Die einfachste Möglichkeit ist, sich Gedanken über die Säule, Laufmittel und das Substrat zu machen.
Wenn man damit nicht auf einen grünen Zweig kommt, lässt man das Gemisch einmal über die Säule laufen und hat 3 Retentionszeiten. Dann gibt man zum zweiten Lauf einen der Stoffe als Reinsubstanz dazu. An der geänderten Peakhöhe siehst du deine Substanz. Arbeitest du quantitativ, kannst du damit auch den Anteil im Mischstandard bestimmen.
m.f.G.
anwesende
Danke! Könntest du mir einen Tipp geben, wie ich bei Glucose und Fructose die Reihenfolge über die Polarität herleiten kann?