Polymerase-Kettenreaktion: wieso abschließend 72°C über mehrere Minuten?

• Denaturierung (z.B. 95°C, 10min)
• Hybridisierung (z.B. 58°C 30sek), Elongation (z.B. 72°C, 45sek), Denaturierung (z.B. 95°C, 45sek)...

So weit, so gut. Aber wieso wird nach Abschluss der letzten Elongation die Temperatur für mehrere Minuten auf 72°C gehalten? (so wie hier) Was ist der Zweck allgemein und was macht die Taq-Polymerase dabei?

LG

Answer 1

[matmatmat]

Dabei geht es drum, alle noch nicht ganz fertigen Produkte zu Ende zu schreiben. Ob das in einer Zeit, in der proof-reading polymerasen wie Phusion in 30s volle 1kb schaffen für 10 Minuten Sinn macht sei mal dahingestellt. Historisch machte es wohl Sinn...

Answer 2

[darkthunder]

Die Taq-Polymerase wird aus Bakterien gewonnen, die in heißen Quellen leben, deshalb ist ihre optimale Arbeitsgeschwindigkeit 72°C und deshalb wird die Temperatur auf dieser Temperatur gehalten. Sie setzt Nucleotide an die DNA an.

Woher ich das weiß: Studium / Ausbildung

Comments

[Triptan]

Das ist schon klar. Aber die Frage ist halt, warum nach der letzten "regulären" Elongationsphase über mehrere Minuten dieses Temperaturoptimum der Polymerase gehalten wird.