Orientierung vom Insert im Vektor
Hallo! Ich finde leider keine befriedigende Antwort auf folgende Frage: Warum ist (manchmal) die Orientierung wichtig, in welcher das Insert in den Vektor ligiert wird bei der Klonierung, vor allem wenn im Insert ein ganzes Gen vorhanden ist? Die Polymerase läuft so oder so drüber, der Triplett-Code verändert sich ja nicht. Danke schon mal für die Antworten.
2 Antworten
Das ist nur notwendig, wenn du das Gen später exprimieren willst. Deshalb musst du schaun, das das vordere Ende des Gens an die Stelle am Vektor mit dem Promotor ligierst.
Danke für die Antworten! Hab nun doch die Möglichkeit gehabt einen Prof zu fragen, welcher mir die gleiche Antwort gab. Hatte den Promotor völlig vergessen!
Hallo,
kann sein, dass das auch völliger Blödsinn ist aber wenn ich mich nicht irre, liegt das einfach an den jeweiligen 5' und 3' Enden des Inserts. Nach der Restriktion arbeitet sich die Polymerase vom 5' zum 3' Ende vor. Liegt das Insert jetzt in falscher Orientierung vor, kann die Polymerase nicht anknüpfen. Lediglich wenn das Insert zwei identische Enden aufweist, ist die Orientierung egal.
Ist etwas knapp aber Genetik ist auch nicht so mein Fachgebiet =)
Ich hoffe, es konnte trotzdem helfen.
Lieben Gruß
stimmt so ;)