Ich muss diese Woche ein Referat über RNAi halten, bei dem im Nachhinein von den Zuhörenden noch Fragen gestellt werden können. Deswegen habe ich mir Gedanken gemacht, welche Fragen (anhand meiner bearbeiteten Punkte) gefragt werden könnten und die mir noch unklar sind:

1) Ich habe gelesen, dass synthetische siRNAs nicht über Vektoren in die Zelle eingebracht werden wie shRNAs. Warum nicht? Über welche Wege werden sie dann eingebracht? Injektion, Füttern, Soaking, Elektroporation,...?

2) Warum erfolgt so die Ausschaltung des Gens nur für relativ kurze Zeit? Werden die siRNAs zu schnell abgebaut?

3) Warum werden shRNAs über Vektoren eingebracht? können sie auch über andere Wege eingebracht werden? Und warum längere Aussachltung der Gene?

4) Wie lange werden die Gene dann ca. ausgeschaltet bzw. wie erfolgt der Abbau der in den RISC eingebauten siRNAs?

5) Kann ein Gen durch RNAi auch für immer stillgelegt werden (Gene-Knockout)?

6) Welche Gene haben Mello/Fire in C. elegans ausgeschaltet und welche Phänotypen haben sich daraus ergeben?

7) Sollte der GC-Gehalt zwischen 30 - 70 % liegen, wegen der drei Wasserstoffbrückenbindungen, die G und C miteinander ausbilden? Denn wenn viele C- und G-motive vorkommen, erschwert das die Stilllegung eines Gens.

8) RNAi in der Biotechnologie: wird sie dort verwendet um v.a. die Ziel-mRNA zu zerstören (starke Hybridisierung) oder auch evt. um die Translation durch Blockade mit RISC zu verhindern (nicht so starke Hybridisierung)? evt. auch Stilllegung des Promotors (Histonmodifikation)?

9) Lipofektion, Polyethylenimin-Komplexierung, virale Vektoren/Expressionsvektoren, Elektroporation: welche dieser Methoden wird am häufigsten verwendet?

10) eine natürliche Funktion der RNAi ist die Regulation der Genexpression. Welches konkrete Beispiel gibt es dafür?

Vielen Dank!!