Hilfe PCR Mastermix Prep - DNA Verdünnung?
Liebe Mitmenschen,
hier eine Frage einer Person mit chronischer Inkompetenz, wenn es um Mathe geht, haha.
Alsooooo, ich möchte morgen wieder eine PCR ansetzen, und möchte 25 Mikroliter insgesamt in meinen Reaction Tubes am Ende haben. Bei einer DNA-Konzentration müsste ich im Endeffekt nur 1,4 Mikroliter DNA pipettieren und das ist mir zu riskant.
Frage 1) Wie verdünne ich das am sinnvollsten? 1:10? (z.B. 10 Mikroliter DNA, 90 Mikroliter Wasser?) Sodass ich 14 statt 1,4 am Ende pipettiere, I guess?
Frage 2) Was ändert sich dann beim Mastermix selbst und beim Mastermix-Anteil für die Reaction Tube? Muss sich der Wassergehalt im Mastermix dann ändern? Und pipettiere ich dann folglich nur 11 Mikroliter vom Mastermix selbst, um bei den gewünschten 25 insgesamt zu landen? Stimmt dann das Verhältnis noch?
Ich bin ehrlich gesagt total überfordert und überfragt.
Wäre sehr dankbar über eure Hilfe und hoffe, es war nicht zu kompliziert formuliert.
Danke im Voraus :)