Wie kann ein DNA-Abschnitt in ein Plasmid eingebaut werden?

Das Plasmid wird dafür zunächst linearisiert. Das bedeutet, dass das ringförmige Molekül an der Stelle, an der die Fremd-DNA eingebaut werden soll, geöffnet wird. Dafür verwendet man ein Restriktionsenzym. Dieses erkennt spezifische DNA-Sequenzen, bindet an diese Stellen und zerschneidet die DNA. Anschließend wird die Fremd-DNA in die geöffnete Stelle insertiert. Schließlich werden die Enden mit Hilfe des Enzyms Ligase verschlossen, d. h. es werden zwischen den DNA-Fragmenten Phosphodiesterbindungen geknüpft. Man nennt diesen Vorgang auch Ligation.